复方丹参滴丸对心肌缺血再灌注大鼠血管内

[摘要]　将48只大鼠随机分为假手术组、缺血—再灌注(MIR)组和复方丹参滴丸组。对三组血浆内皮素(ET)、血清丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性进行检测和相关分析,并观察各组心肌毛细血管墨汁灌流数。结果与假手术组比较,MIR组SOD活性及NO含量均明显下降,MDA及ET含量均明显增加(P0.05,0.01),原缺血部位心肌毛细血管墨汁灌流数明显减少(P0.01);与MIR组比较,复方丹参滴丸组SOD活性及NO含量均明显升高,MDA及ET含量均明显降低((P0.05,0.01),原缺血部位心肌毛细血管墨汁灌流数明显增加(P0.01)。提示复方丹参滴丸能有效改善MIR大鼠的血管内皮功能,对缺血—再灌注心肌具有保护作用。

[关键词]　复方丹参滴丸;再灌注损伤;内皮,血管;自由基;血管活性因子

[中图分类号]R.2[文献标识码]B

[文章编号]X()

随着急性心肌梗死再灌注治疗的广泛开展,心肌缺血—再灌注(MIR)损伤日益引起临床。一氧化氮(NO)和内皮素(ET)是近年MIR损伤研究的热点。中药丹参滴丸通过其活血化瘀作用,广泛用于治疗冠心病,在保护MIR损伤中有其独特作用。年1～12月本实验通过观察复方丹参滴丸对大鼠MIR损伤中内皮功能的影响,以探讨其作用机制。

1材料与方法

1.1　材料　清洁级Wistar大鼠,体质量～g,雌雄各半,由吉林大学实验动物中心提供。复方丹参滴丸;ET、放免测试盒均由解放军总院科技放免所提供;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及NO测定试剂盒均由南京建成生物研究所提供。

1.2MIR模型制备及处理48只Wistar大鼠随机分为假手术组、MIR组及复方丹参滴丸组,各16只。参照文献方法制作MIR损伤模型。将MIR组及复方丹参滴丸组乙醚吸入麻醉后,仰卧固定于手术台,剪去胸前鼠毛,先用缝线在开胸部位做一荷包,自左侧3～4肋间开胸,暴露心脏,于肺动脉圆锥及左心房间找到冠脉左前降支,于左心耳下2～3mm处用0号缝线结扎冠脉,将心脏送回胸腔,打开时间不超过30s。于结扎6h后再次开胸剪断丝线再灌流,复制成大鼠MIR模型。为防止大鼠术后感染,每日肌注青霉素40万U/只,连续1周。所有大鼠于(23±1)℃、30%～40%湿度下喂养。假手术组仅置缝线而不结扎冠脉,其他处理相同。复方丹参滴丸组按81mg/kg灌胃给药,1次/d,体积为1ml/g,连续5周。假手术组及MIR组均灌胃等量生理盐水,1次/d,连续5周。

1.3SOD活性、MDA及ET含量检测　取MIR模型组、复方丹参滴丸组和假手术组各8只,由腹主动脉插管取血,用黄嘌呤氧化酶法检测血清SOD活性,用硫代巴比妥酸比色法检测血清MDA含量,用放射免疫分析法测定血浆ET含量,采用硝酸还原酶法测定血清NO含量。均按试剂盒说明书操作。

1.4　冠脉微循环的观察　另取MIR组、复方丹参滴丸组和假手术组各8只,采用墨汁灌注法观察冠脉微循环。由心尖偏左进针,穿入左心室,在不超过90～mmHg压力下灌注生理盐水,剪开一叶肺脏,观察流出液。待流出液呈无色透明时停止冲洗,再改灌墨汁灌注液(由北京牌一得阁墨汁与低分子右旋糖酐7∶3的比例配制而成),直至全身逐渐显示均匀暗灰色。然后结扎进出心脏的主要动静脉,解剖取出心脏,置10%甲醛中固定,在与心肌纤维走行相平行的方向切取左心室心肌,制作透明切片。每只大鼠随机选三张病理切片,使用显微镜(×倍)视野下显微摄取系统,采集并储存病理切片图像。每张切片图像分别造3个视野以Image2ProPlus图像分析软件计毛细血管的数目(镜下呈黑色点状或条索状)。分左室前壁外层,左室前壁中内层,室间隔前2/3等3个部位分别观察计数。

1.5　统计学方法　应用SPSS10.0统计软件。数据以gx±s表示,组间比较采用单因素方差分析,组内比较采用LSD法。P≤0.05为有统计学差异。

2结果

2.1　三组SOD活性、MDA及ET含量比较　见表1。

2.2　三组心肌毛细血管墨汁灌流数比较　见表2。

3讨论

NO和ET是最重要的两种内皮源性血管活性因子,两者作用相反,在维持血管正常结构和功能方面起重要作用。ET21不仅具有强大的长效缩血管,促血小板、单核巨噬细胞的聚集、黏附作用,还是强大的促平滑肌细胞增生剂;其过量释放可引起冠状动脉痉挛、心肌缺血坏死,加重心肌MIR。与之相反,NO则是内皮合成和分泌的最重要的扩血管物质。生理情况下NO能够影响ET的分泌,并在生物学作用上与之相拮抗,二者的动态平衡对维持心血管系统恒定的舒张状态,调节冠状动脉基础张力有重要作用。本实验结果显示,MIR模型组与假手术组比较,血清中NO含量均明显减少,血浆中ET含量均明显增加,且两者呈显著负相关。表明MIR诱发血管内皮功能紊乱,导致冠状动脉内皮细胞合成与分泌功能障碍,此时NO的合成释放减少,其内皮保护作用和拮抗ET作用削弱,ET含量增加,致使内皮损伤进一步加重,促进MIR损伤的发生发展。

目前已知自由基介导的脂质过氧化反应是MIR损伤的重要环节。研究表明,MIR时由于大量氧自由基产生,使SOD消耗增多,活力下降,血管内皮细胞受损,NO合成、释放减少,灭活加快,同时血小板聚集,凝血酶及转化生长因子β产生增多,加速缺血区内皮细胞合成、分泌ET,黏附于血管内皮的中性粒细胞,可将外源ET原转化为有活性的ET,导致ET大量增加。

复方丹参滴丸是以丹参和三七为主药制成的新型复方药物,有明显活血化瘀、理气止痛之功效,广泛应用于临床。其中丹参具有保护内皮细胞,促进内皮释放血管舒张因子NO,扩张血管,增加血流的作用。本实验观察到复方丹参滴丸组与MIR模型组比较,MDA含量及血浆ET含量明显减少,血清SOD活性及NO含量均显著升高,与假手术组比较无统计学意义。表明复方丹参滴丸能明显降低MTR损伤大鼠血清MDA含量,提高SOD活性。提示此药既保护内源性自由基清除剂SOD活力,又减轻心肌细胞膜脂质过氧化的损伤,从而增强了心肌细胞的抗自由基损伤能力,保持心肌细胞膜结构的完整性,避免了心肌细胞内Ca2+超负荷及心肌细胞不可逆性损伤,从而改善血管内皮功能。本实验还显示,复方丹参滴丸组与MIR组比较,原缺血部位心肌毛细血管墨汁灌流数明显增加,表明此药能提高全身血液循环功能,有效改善MIR冠脉微循环缺血部位的血液灌流,从而进一步改善血管内皮功能。

总之,复方丹参滴丸能有效改善MIR大鼠的血管内皮功能,为临床治疗提供了基础依据。

作者简介：范宝晶,陈满秋,周大亮,刘宗武,赵学忠,于小风,曲绍春,睢大员

(医院,吉林长春;2吉林大学药学院)

论文出自：山东医药年第49卷第1期

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