技术心肌缺血再灌注损伤动物模型建模方法

心梗简介

冠状动脉粥样硬化性心脏病是最重要的心血管疾病，简称“冠心病”，亦称“缺血性心脏病”。冠心病可分为5种类型，包括心绞痛型、心肌梗死型、无症状性心肌缺血型、心力衰竭和心律失常型及猝死型，心肌梗死为冠心病中最严重的类型之一。心肌梗死（MI）作为心血管疾病的最大死因之一,是严重影响人们生命健康的重大疾病，心肌梗死是指心肌的缺血性坏死，为在冠状动脉病变的基础上，冠状动脉的血流急剧减少或中断，使相应的心肌出现严重而持久地急性缺血，最终导致心肌的缺血性坏死，可并发心律失常、休克或心力衰竭，常可危及生命。流行病学调查结果显示，心肌梗死在我国发病率逐年上升，每年新发病人群至少50万，现有患者至少万，严重危害大众健康。建立适当的心梗动物模型，不仅促进新药的开发，也为该病的发病机制和病理生理改变提供重要资料，还能够为临床提供可靠的治疗依据。

建模动物

常用的心肌缺血/再灌注损伤动物模型建模动物有大鼠、小鼠、兔、猪等。和其他动物相比，大鼠在进化上与人类比较接近，因其冠状动脉的侧支循环较少，心肌坏死的时间较早，心率也相对比较稳定，且制作大鼠模型的费用较低，所以大鼠就成为建立心肌缺血/再灌注模型的首选动物，结扎大鼠的左冠状动脉前降支导致心肌缺血、坏死是目前国内外公认的模型制备方法。此外，由于实验动物不同，选择的结扎部位也不同，大鼠、小鼠的冠状动脉左前降支一直延伸到心尖部位，左旋支不发达，所以选择结扎冠状动脉左前降支建立模型。兔和猪等大中型动物冠状动脉左前降支发育得比较短小，甚至有些动物左前降支的血管长度不超过1cm，而左旋支覆盖心脏的面积大，所以选择结扎冠状动脉左旋支建立模型。

建模方法

1）心脏原位结扎法

将动物称重后麻醉，术前采用心电图检测，接呼吸机，待呼吸平稳后，在大鼠的左胸从右下向左上做一斜行的切口，逐层分离胸肌后，在第4肋间沿下位肋骨上缘切开肋间肌，进入胸腔，用镊子将心包轻轻撕开，找到左心耳与肺动脉圆锥之间的冠状动脉前降支，在距主动脉根部3mm处用7-0无创缝合线结扎冠状动脉前降支，结扎30分钟后将线取出，使心脏血液再灌注。其优点是心脏处于正常解剖位置，对心脏的生理功能影响较小，但需剪断肋骨，耗时长，结扎冠状动脉时难把握进针位置及深度，操作困难。

2）提线法

提线法包括推管法和压管法，推管法：将线穿过硬塑管，穿出后轻提两边线头，向下推动该硬塑管，用力压紧线去阻断冠状动脉的血流，一定时间后放松丝线引起再灌注。压管法：先将线穿过中央有圆孔的软垫，再将线和软垫穿过硬塑管，推动硬塑管时连同小软垫一块压向冠状动脉，实现冠状动脉血流的阻断，放松丝线和软垫则造成再灌注。提线法的优点是操作方法简单，手术耗时短，但心脏跳动可能会使管的位置发生改变，不能保证实验过程中维持恒定的缺血效果，管切面接触心脏表面，可能造成机械损伤。

3）胸腔外结扎法

麻醉开胸后，将心脏挤出，充分暴露心脏及其表面的血管，结扎冠状动脉前降支，其优点是心脏被拉到胸腔外，视野好，更容易进行手术操作，但心脏生理功能会受到一定影响，且容易造成动物死亡。

4）电刺激法

麻醉后用定向仪插入两支涂绝缘漆的不锈钢针，以弱、强刺激（弱刺激为0.8~1.6mA，强刺激为4~8mA）交替刺激右侧下丘脑背内侧核，每次刺激5分钟，间隔1~3分钟。

5）药物法

最常使用的造型药物为4%异丙基肾上腺素，给大鼠皮下注射50mg/kg体重；或将药物加入ml盐水中从耳静脉匀速滴入，或直接将药物注入腹腔均可造模。也可静脉给予麦角新硷0.2mg/kg体重，造成冠状动脉痉挛。

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